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    TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(DAB顯色法)

    更新日期:2023-12-14

    訪問量:1567

    廠商性質:生產廠家

    所在城市:上海市

    簡要描述:
    細胞凋亡時,部分DNA內切酶會被激活,進而切斷基因組DNA。TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) 細胞凋亡檢測試劑盒可以用來檢測組織細胞在凋亡晚期過程中細胞核DNA的斷裂情況。
    品牌其他品牌供貨周期現貨
    應用領域醫療衛生,生物產業

    其原理是在末端脫氧核糖核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的作用下,在基因組DNA斷裂時暴露出的3′-羥基(3′-OH)末端摻入生物素(Biotin)標志的dUTP,隨后通過Biotin與連接辣根過氧化酶的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)特異結合,在辣根過氧化酶底物二氨基聯苯胺(DAB)的存在下,產生深棕色的不溶物,從而特異準確地定位凋亡的細胞。

    本試劑盒可用于石蠟切片、冰凍切片和細胞樣本(細胞涂片或爬片)的凋亡原位檢測,檢測結果可在普通光學顯微鏡下直接觀察計數。
    包裝清單:

    產品編號產品名稱包裝1包裝2
    SJ1271
    TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(DAB顯色法)20T50T
    說明書一份



    產品組成:

    編號

    組分

    20T

    50T

    儲存條件

    試劑(A)

    50× Proteinase K

    20 ul

    100 ul

    -20℃

    試劑(B)

    10 × DNase I Buffer

    100 ul

    500 ul

    -20℃

    試劑(C)

    DNase I

    20 ul

    100 ul

    -20℃

    試劑(D)

    Equilibration Buffer

    2 ml

    10 ml

    -20℃

    試劑(E)

    5×TdT Enzyme Buffer

    200 ul

    1 ml

    -20℃

    試劑(F)

    Recombinant TdT Enzyme

    20 ul

    100 ul

    -20℃

    試劑(G)

    Biotin-11-dUTP

    20 ul

    100 ul

    -20℃

    試劑(H)

    dATP

    20 ul

    100 ul

    -20℃

    試劑(I

    Streptavidin-HRP

    20 ul

    100 ul

    4℃

    試劑(J

    DAB-A solution

    1 ml

    5 ml

    -20℃

    試劑(K

    DAB-B solution

    50 ul

    250 ul

    -20℃


    保存條件:

    Streptavidin-HRP, 4℃, 其余試劑-20 ℃保存,一年有效。

    操作步驟:

    1、樣本處理:

    a) 石蠟切片:經二甲笨、酒精脫蠟,復水。脫蠟應充分。

    b) 冰凍切片:流水沖洗,去除OCT包埋膠后,用純水洗3次。

    c) 細胞飛片:用組織固定液固定后,用PBS洗三次,每次5分鐘。1% Triton X-100處理10分鐘,用PBS洗三次,每次5分鐘。

    2、蛋白酶消化

    將1ul 試劑(A)50× Proteinase K稀釋于50ul PBS中,滴加到組織上,37℃孵育10-20分鐘。消化結束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。

    3、封閉

    用3%的雙氧水(H2O2)室溫封閉10分鐘,封閉結束后用PBS洗三次,每次5分鐘。

    4、陽性對照組織的處理

    將組織用DNase I消化,以獲得斷裂的DNA,即成Tunel染色陽性的對照。陽性對照組織也可以選用小鼠的小腸組織切片。

    純水

    46 ul

    試劑(B): 10 × DNase I Buffer

    5 ul

    試劑(C): DNase I

    1 ul

    共計

    50 ul

    50 ul DNase I消化液滴加于組織上,37℃孵育10-30分鐘,消化結束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。

    5、連接:

    連接反應前用50 ul Equilibration Buffer孵育標本5-10分鐘。孵育過程中按下表配制連接工作液。去除標本上的Equilibration Buffer后,直接滴加50ul 連接工作液,37℃孵育1-2小時,染色結束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。

    試劑(D)Equilibration   Buffer

    37 ul

    試劑(E)5×TdT Enzyme   Buffer

    10 ul

    試劑(F)Recombinant   TdT Enzyme

    1 ul

    試劑(G)Biotin-11-dUTP

    1 ul

    試劑(H)dATP

    1 ul

    共計

    50 ul

    6、標志

    取1 ul 試劑(I)Streptavidin-HRP加入到50ul PBS 中,混勻后滴加至組織上,37℃避光孵育30分鐘,隨后用PBS洗三次,每次5分鐘。

    7、顯色

    取50 ul 試劑(J)DAB-A solution 與2.5 ul 試劑(K)DAB-B solution混勻后,滴加至組織上,室溫顯色反應30秒至5分鐘。顯色結束后,用PBS洗三次,每次5分鐘

    8、蘇木素復染

    每組織上滴加數滴Mayer’s蘇木素染色液,染色1-5分鐘,隨后用自來水沖洗反藍,如蘇木素染色過深,可用1%鹽酸酒精溶液分化數秒,再次反藍;如蘇木素染色過淺,可用蘇木素再次染色,并延長染色時間。

    9、封片觀察

    經梯度酒精脫水,二甲苯透明后,滴加中性樹膠,加蓋玻片封片,光學顯微鏡下觀察拍照。

    注意事項:

    1、Proteinase K 消化時間需要摸索,冰凍切片 10 min 左右,石蠟切片時間應適當延長。

    2、陰性對照體系:配制連接工作液時用純水替代TdT Enzyme。

    3、連接與標志反應時應注意避光。

    4、實驗過程中請穿戴手套、實驗服等,做好個人防護。

    備注

             產品信息可能會有優化升級,請以實際標簽信息為準。

    本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。

    為了您的安全和健康,請在實驗過程中做好防護工作。



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